عام

النمو على مخلب الكلب

النمو على مخلب الكلب


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

النمو على مخلب الكلب إكسبلانتس هي طريقة موضوعية لتحديد نشاط مادة كيميائية اختبارية ، وهي مفيدة لفحص العوامل العلاجية المحتملة. يعتمد الفحص على تحفيز انقسام الخلايا في بصيلات الشعر المستأصلة والغدد الدهنية للكلب. إنه أكثر حساسية من اختبار أذن الفأر واختبار عين الأرنب وهو مفيد بشكل خاص للعوامل ذات السمية المنخفضة.

توضع الخزعات الاستئصالية من الجلد أو الأنسجة المخاطية في غرفة رطبة وتعالج بمواد كيميائية اختبار. يمكن وضع الخزعات الاستئصالية (إإكسبلنتس الأنسجة) في الآبار الفردية من لوحة متعددة الآبار أو في لوحة مسطحة القاع 96-جيدا microtiter. يُسمح بالنمو لمدة 2 إلى 14 يومًا ، اعتمادًا على المركب الذي يتم اختباره.

تتكون إإكسبلنتس الأنسجة بشكل عام من البشرة والأدمة و / أو الغدد الدهنية. يتم تحديد النمو من خلال طريقة مباشرة ، حيث يتم زراعة النباتات المستأصلة في وسط مناسب يحتوي على إنزيم مناسب ، على سبيل المثال ، أدينوسين ثلاثي الفوسفاتيز (ATPase) ، والذي يكون خاصًا بنوع نسيج معين والذي يعزز نمو هذا النسيج المعين. الطريقة الأكثر حساسية هي مراقبة تكاثر الخلايا من خلال دمج 3H-thymidine. يتم تقييم تكاثر الخلايا عن طريق تحديد دمج الثيميدين المشع (3H-Tdr) في DNA الخلية.

تصف الطريقة التالية تحضير ونمو إإكسبلنتس في أطباق ميكروتيتر 96 بئر.

يتم استئصال الخزعات الاستئصالية من العنق الظهري للفأر الخالي من الشعر (HR) أو الكلب أو الإنسان. بشكل عام ، يمكن أخذ الخزعات من موقع يسهل الوصول إليه ، ومن غير المحتمل أن يسبب ألمًا للمريض ، ويحتوي على كمية كبيرة من الأنسجة. يتم استئصال الخزعات باستخدام خرامة خزعة قطرها 8 مم. يتم وضع الخزعة على مرشح غشاء سليلوز 0.4 ميكرون مركب على صفيحة 96 بئر ، ويتم الاحتفاظ بها في مكانها مع مقطع خزعة. يتم بعد ذلك تغطية الخزعات بوسط مستنبت مكافئ للجلد ، يتكون من مستخلص من الطبقة القرنية من الخنازير. تم تحضين البئر بدرجة 37 درجة. ج. لمدة 8 ساعات للسماح للأنسجة بالاستقرار في قاع البئر ، ثم يتم قطع الأغشية. تتم إزالة محتويات البئر ، جنبًا إلى جنب مع مستخلص الطبقة القرنية ، وإضافتها إلى بئر من 96 لوحة ميكروترية لزراعة الأنسجة. يتم تحضين تعليق الخلية الناتج في مستخلص الطبقة القرنية عند 37 درجة. ج. لمدة 24-48 ساعة.

يتم شطف المعلق الخلوي مرة واحدة بمحلول ملحي مخزون بالفوسفات ويتم تحضينه لمدة 24-48 ساعة إضافية في وسط جديد يحتوي على 10٪ مصل بقري جنيني و 2.5٪ عامل نمو بشري بشري (HEGF). الخلايا لها مظهر طبقة واحدة من الخلايا الظهارية مع تقاطعات الخلايا الخلوية في المحيط. قد تحتوي الخزعة السليمة على 100-200 xcexcm من الأنسجة. نظرًا لإزالة الخزعة قبل زراعة الخلايا ، تحتوي الخزعة على كمية كبيرة من المواد غير المستخدمة في هذا الفحص ، بما في ذلك الخلايا الليفية والخلايا البطانية وخلايا العضلات الملساء والخلايا العصبية والأوعية الدموية والخلايا الكيراتينية ومقادير كل نوع من الخلايا قد تختلف من خزعة إلى خزعة. يتضرر النسيج أيضًا بحلول وقت الخزعة الذي قد يكون قد تم إجراؤه لفترة طويلة من الوقت قبل معالجته لزراعة الخلايا. ونتيجة لذلك ، فإن الخلايا التي يتم اختبارها بحثًا عن فائدتها المحتملة في المقايسات القائمة على الخلية أو كمصدر للخلية أو الأنسجة للمقايسات القائمة على الخلية ليست ثقافة متجانسة ، ولكنها تحتوي على مزيج من أنواع الخلايا المشتقة من الخزعة.

هناك عدد من المشاكل في النهج الحالي. عندما يتم استخدام نسيج طلائي مثل خزعة الجلد لزراعة الخلايا ، فإن وجود الخلايا اللحمية الملوثة سيؤثر على نتائج أي اختبار يتم إجراؤه باستخدام الخلايا المستنبتة. بالإضافة إلى ذلك ، لا تتكاثر الخلايا الظهارية التي تم الحصول عليها من الخزعة في وسط الثقافة بطريقة موحدة. هذا يؤدي إلى كتل من الخلايا التي قد تحتوي على أعداد كبيرة من الخلايا اللحمية والتي يصعب فصلها إلى مجموعة خلايا مفردة متجانسة. علاوة على ذلك ، عند إزالة خزعة كبيرة من الجسم ، قد يكون الجلد تحت ضغط كبير. نتيجة لذلك ، قد تؤدي إزالة الخزعة إلى تمدد ظهارة الجلد ، مما يتسبب في تغيير شكل الخلايا في الخلايا الكيراتينية. هذا ينطبق بشكل خاص على العينات المأخوذة من راحة اليد وباطن القدمين.

تحل الخزعات الخاصة بالاختراع الحالي هذه المشكلات من خلال توفير مساحة كبيرة من الأنسجة غير الجلدية التي يمكن إزالتها من المريض ، والتي توفر إنتاجية عالية من خلايا البشرة المناسبة لمجموعة متنوعة من التطبيقات. تضمن المساحة السطحية الكبيرة لهذا النسيج أيضًا بقاء عدد كبير من الخلايا الكيراتينية قابلة للحياة ، من خلال الابتعاد عن موقع الإصابة.

يعتمد الاختراع الحالي على اكتشاف أن خلايا البشرة ، بما في ذلك جميع خلايا البشرة ، يمكن زراعتها مباشرةً من خزعة كبيرة من الأنسجة غير الجلدية مثل لسان المزمار.

إن هدف الاختراع الحالي هو توفير أنسجة خزعة محسنة والتي ستكون أقل ضررًا للمريض من خزعة الجلد ، ومع ذلك ستوفر عائدًا أكبر من الخلايا الظهارية والخلايا الأخرى التي يمكن من خلالها اشتقاق تطبيقات مختلفة.

سيتضح هذا الكائن والأشياء والمزايا الأخرى للاختراع من الوصف التالي.


شاهد الفيديو: How to Slow Feed Your Dog. Dog Slow Feed Products u0026 Hacks (قد 2022).